自1986年第一個(gè)治療性抗體進(jìn)入臨床以來(lái)，抗體藥物得到了迅速的發(fā)展。迄今為止，近百個(gè)治療性抗體藥物成功問(wèn)世，抗體藥物成為了現(xiàn)代生物醫(yī)藥的重要組成部分。經(jīng)過(guò)多年的發(fā)展，抗體藥物的下游純化技術(shù)逐漸形成以經(jīng)典三步層析為主的成熟工藝。為達(dá)到理想的純化效果和成本控制，工業(yè)上對(duì)該工藝中的三種層析介質(zhì)的載量、壽命、分辨率等方面提出了很高的要求。在這三種層析介質(zhì)中，Protein A親和層析介質(zhì)占據(jù)了主導(dǎo)地位，可謂是皇冠上的明珠。
抗體藥物的工業(yè)大規(guī)模純化對(duì)Protein A親和層析介質(zhì)的要求往往表現(xiàn)在三個(gè)方面：更高的載量，以應(yīng)對(duì)更大的培養(yǎng)液處理能力;更高的耐堿性，以應(yīng)對(duì)更好的CIP和更多的重復(fù)使用性能;更強(qiáng)的基球強(qiáng)度，以應(yīng)用于更快的操作速度。東富龍千純針對(duì)三個(gè)方面的要求，推出了經(jīng)典的、具有廣泛行業(yè)認(rèn)同的Rigose MabPureA LX填料。
Rigose MabPureA LX是一種將耐堿性改造的重組蛋白A鍵合在高剛性瓊脂糖微球上形成的親和層析介質(zhì)，其不僅可以耐受0.1-0.5 M NaOH清洗，且其配基在劇烈洗脫及清洗條件下脫落率低，具有高強(qiáng)度、高載量、高耐堿性等優(yōu)點(diǎn)，主要用于從細(xì)胞培養(yǎng)液中規(guī)模化捕獲抗體。
01 不同保留時(shí)間下的載量
填料的載量是評(píng)估純化生產(chǎn)能力的重要指標(biāo)之一，更高的載量可以提高生產(chǎn)效率節(jié)約生產(chǎn)成本。以hIgG作為樣品，通過(guò)檢測(cè)不同保留時(shí)間下樣品流穿的情況來(lái)獲得相應(yīng)的載量，可以發(fā)現(xiàn)，與國(guó)外某品牌同類產(chǎn)品相比，Rigose MabPureA LX具有更高的載量?jī)?yōu)勢(shì)。
02 使用壽命和穩(wěn)定性
CIP是填料清潔非常重要的步驟，Rigose MabPureA LX可以用0.1-0.5M NaOH進(jìn)行再生。我們用0.1M NaOH接觸15min結(jié)合平衡和低pH洗脫來(lái)驗(yàn)證填料使用壽命，并且與國(guó)外某品牌進(jìn)行平行對(duì)比。通過(guò)選定相應(yīng)循環(huán)次數(shù)，用hIgG進(jìn)行載量測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，500次循環(huán)后Rigose MabPureA LX仍能保持80%以上的載量。
將Rigose MabPureA LX在0.2M NaOH下分別浸泡24h，48h，72h，然后進(jìn)行載量測(cè)定，并且用國(guó)外某品牌同類產(chǎn)品進(jìn)行對(duì)照，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)72h浸泡后Rigose MabPureA LX載量仍能保持80%左右。
03 收率分析
以CHO細(xì)胞培養(yǎng)液上清作為樣品，通過(guò)對(duì)三個(gè)批次的Rigose MabPureA LX和國(guó)外國(guó)內(nèi)同類型填料在pH3.5洗脫下的收率進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Rigose MabPureA LX的收率處于較高水平，并且批次間的穩(wěn)定性好。
04 純化后聚體分析
親和層析步驟中聚體的占比是非常重要的指標(biāo)，而控制單抗聚體含量，一方面是為降低雜質(zhì)，提高純度;另一方面是因?yàn)樵谥委熯^(guò)程中，聚體的存在不僅會(huì)降低藥物的效果，還會(huì)引起機(jī)體的免疫反應(yīng)，具有潛在的副作用。選擇三個(gè)批次Rigose MabPureA LX，用CHO細(xì)胞培養(yǎng)液上清作為樣品，對(duì)pH3.5的洗脫下來(lái)的抗體，進(jìn)行了聚體含量的測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，經(jīng)Rigose MabPureA LX純化后聚體含量都在0.5%以下，對(duì)比國(guó)外和國(guó)內(nèi)的同款填料，Rigose MabPureA LX聚體含量都處在較低水平。
05 生產(chǎn)批次穩(wěn)定性
生產(chǎn)批次的穩(wěn)定性對(duì)于客戶的純化生產(chǎn)至關(guān)重要，通過(guò)穩(wěn)定的生產(chǎn)工藝控制和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臋z測(cè)，可以更好的保證Rigose MabPureA LX產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。
06 應(yīng)用案例
目前，單抗的層析工藝已經(jīng)較為成熟，其中經(jīng)典的三步法層析是公認(rèn)高效、穩(wěn)定、平臺(tái)化的工藝方法，應(yīng)用也較為成熟，使用Rigose MabPureA LX、Rigose Q、Rigose SP Plus三步法來(lái)純化單抗，收率及HCP、內(nèi)毒素等殘留的去除均有不錯(cuò)的效果。
(1)親和層析
Rigose MabPureA LX親和層析主要作用是捕獲目的蛋白，去除HCP、病毒、HC-DNA和其他雜質(zhì)
(2)陰離子交換層析
Rigose Q陰離子交換層析去除殘留Protein A、HCP、HC-DNA、HC-RNA及內(nèi)毒素等。
(3)陽(yáng)離子交換層析
Rigose SP Plus陽(yáng)離子交換層析目的是進(jìn)一步去除多聚體、HCP、HC-DNA等
經(jīng)典三步法純化結(jié)果如下表所示
以下為東富龍千純?yōu)榭贵w藥物純化提供的三種經(jīng)典層析介質(zhì)的性能
(1)Rigose MabPureA LX親和介質(zhì)
(2)Rigose Q陰離子交換介質(zhì)
(3)Rigose SP Plus陽(yáng)離子交換介質(zhì)
07 Rigose平臺(tái)的技術(shù)支持
多年的技術(shù)深耕讓東富龍千純具備了為生物制藥客戶提供產(chǎn)品和技術(shù)支持的強(qiáng)大能力。無(wú)論是對(duì)客戶工藝的性能驗(yàn)證，還是產(chǎn)品的穩(wěn)定性驗(yàn)證，Rigose平臺(tái)都能夠?yàn)榭蛻籼峁┤轿坏姆?wù)。Rigose系列層析介質(zhì)可提供包括產(chǎn)品說(shuō)明書、質(zhì)檢文件COA、法規(guī)文件RSF(Regulatory Support File)等一系列文件體系，為生物藥物的驗(yàn)證和報(bào)批提供有利的支持。同時(shí)，以上抗體純化填料于2022底通過(guò)美國(guó)FDA DMF備案(DMF # 037782)，可為抗體藥物的中美雙報(bào)提供有效的支持。
結(jié)語(yǔ)
秉持“服務(wù)生物醫(yī)藥，品質(zhì)鑄就雙贏”宗旨和理念，我們始終將服務(wù)客戶放在第一位。依靠綠色化層析介質(zhì)生產(chǎn)工藝和未來(lái)國(guó)內(nèi)最大的生物分離介質(zhì)上海生產(chǎn)基地，東富龍千純?nèi)擞行判暮湍芰橹袊?guó)乃至全球的生物醫(yī)藥行業(yè)做出自己的貢獻(xiàn)。
（東富龍）
